免疫检查点抑制剂疗法已经彻底改变了癌症治疗的格局，在多种癌症中取得良好的临床效果。但是，也有一些患者的治疗效果并不理想。如果能够找到合适的生物标志物对免疫治疗效果进行预测，也许能够改善病人的临床结果。目前大多使用免疫组化（IHC）检测肿瘤或免疫细胞中的PD-L1。

IL-8是第一个被发现的趋化因子，在多种肿瘤细胞中表达。IL-8能够增强人中性粒细胞的趋化性，并发挥直接的促癌作用，包括促进血管生成、肿瘤细胞去分化及侵袭、转移等。在最新的Nature Medicine期刊上，同期发表了两篇IL-8相关的最新研究发现，揭示IL-8既可作为免疫检查点疗效预测标志物，还可作为有效的癌症治疗靶标。

本次研究检测了1344名接受免疫检查点抑制剂单药或联合治疗患者血清中的IL-8水平。通过分析IL-8水平、关键免疫细胞因子及细胞群之间的关系，利用多重免疫染色技术对NSCLC、黑色素瘤和胃癌中IL-8、MPO、CD15、DAPI、cytokeratin（CK）等与中性粒细胞增加肿瘤浸润之间的正相关性，发现IL-8对免疫反应具有抑制作用，与肿瘤微环境中的耐受性细胞浸润之间存在密切关系。

文章指出，IL-8水平的升高与肿瘤的不良特征有关，可以作为包括免疫检查点抑制剂在内的不同治疗技术的负性预后指标。并且IL-8还被认为是一种候选的治疗靶点。如上文提到的，IL-8具有促血管生成功能，可能是血管内皮生长因子抑制剂逃逸的基础，因此以IL-8或IL-8受体为靶点的药物正在开发中。

在肿瘤学研究中，最尴尬的一件事情就是样本量不足，尤其是要研究多种蛋白的相互作用或细胞定位时。因为一般免疫组化仅能实现1-2个目的蛋白的染色，但要实现更多靶点的染色就“难于上青天”了。为此，研究人员开发了一种免疫组化多重染色技术，实验结果如上文图片，可以在一张切片上显示多种目的蛋白的染色结果。

作为一项新型的免疫组化染色技术，免疫组化多重染色的实验原理是什么呢？操作过程与单一染色有什么不同呢？有哪些实验设计需要优化呢？

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